在开发降解剂化合物时，评估其细胞通透性以及对靶蛋白和 E3 连接酶的亲和力非常重要。NanoBRET® Target Engagement (TE) Assays 能够测量活细胞中蛋白质-小分子结合相互作用，提供化合物通透性以及靶标亲和力和滞留时间的定量测定。 我们已经使用 NanoBRET®™ TE Assay成功开发了针对药物发现中重要的多个靶标类别的检测方法，包括激酶、HDAC和BRD。最近，该技术已应用于 E3 连接酶，并且已开发用于 CRBN、VHL、XIAP、cIAP 和 MDM2 的 NanoBRET® TE 技术。 NanoBRET® TE E3 Ligase Assays可在活细胞或经过渗透处理的细胞中进行，使用户能够评估化合物对 E3 连接酶的亲和力以及化合物透膜性。

上图. 使用 NanoBRET^® TE Assay 测量靶向 BRD4 的 BET 降解剂的细胞亲和力。使用 BRD4 NanoBRET^® TE Assay比较两种靶向 BRD4 的相关 PROTAC（左图）的细胞结合亲和力。使用 NanoBRET^® TE CRBN 检测比较活细胞和透化细胞中降解剂对 E3 连接酶 CRBN 的亲和力，以评估化合物通透性对测得的结合亲和力的贡献（右图）。研究表明，dBET6 比 dBET1 更具渗透性，并且与 dBET1 相比，dBET6 对 CRBN 的亲和力略高。

量化细胞内可用性

我们还提供生化方法用于监测小分子与E3泛素连接酶之间的二元相互作用。此外，这些方法还能检测小分子与目标蛋白之间的相互作用。这里的例子展示了检测了分子胶与cereblon复合物的相互作用。

生化法检测小分子与目标蛋白相互作用原理示意图概述。

上图.检测分子胶与cereblon复合物的相互作用。为了确定分子胶的相对亲和力，我们将它们滴定到cereblon-沙利度胺tracer复合物中。随着tracer的竞争移除，发光信号减少。相对IC50值与在裂解细胞中进行的靶标占据检测结果相关。