高质量的体外转录（IVT）产物对于RNA疗法开发至关重要。然而，IVT过程可能会产生双链RNA (dsRNA)副产物，引发高免疫原性，影响药物安全性和有效性。因此，对dsRNA进行灵敏和定量的评估对于控制和优化mRNA治疗和疫苗研发过程非常关键。

Promega最新开发的生物发光法Lumit^® dsRNA Detection Assay，无需使用抗体，无需洗涤或样品转移步骤，最快75分钟即可完成检测。且不依赖片段大小和序列，能够对混合溶液中的 dsRNA 进行灵敏的定量，克服了现有ELISA和印迹检测的不足。

产品应用

• mRNA治疗和疫苗开发：用于确保mRNA产品的安全性和有效性，满足法规要求。

• 体外转录过程优化：用于优化IVT和纯化工作流程，以减少dsRNA污染。

• 质量控制和工艺开发：用于开发新的QC检测方法，进行常规检测。

• 高通量应用：支持进行大规模污染物筛查；可灵活使用独立组件，适用于自动化工作流程。

• 基础和转化研究：研究 dsRNA 在 mRNA 稳定性和免疫激活中的作用；开发具有降低免疫原性的新的 mRNA 递送系统。

产品特点

• 高灵敏度：检测限LOD低至3 pg/ml。  

• 卓越的特异性：与ssRNA或DNA无交叉反应。 

• 独特的检测原理：利用内源性dsRNA结合蛋白，提供更好的灵敏度和重复性。  

• 定量和通用的检测：不依赖dsRNA的大小或序列（≥30 bp）。  

• 简化的工作流程：无需洗涤，结果只需75分钟即可获得。   

• 最小的样本需求：每个孔仅需纳克级的总RNA。  

• 新型dsRNA标准品：提供高度纯化（>95%）和均质的标准品，确保检测的准确性和一致性。

应用数据

1. Lumit^® dsRNA Detection Assay 与dsRNA ELISA试剂盒检测范围的比较，两种分析方法均测试了它们检测不同种类dsRNA污染物的能力：

上图：使用Lumit^® dsRNA Detection Assay

上图：使用dsRNA ELISA试剂盒。

说明：

• 60bp dsRNA：合成的dsRNA，包含SARS-CoV-2刺突开放阅读框（ORF）的前60个碱基对。

• 142bp dsRNA "标准品"：市售的、化学定义明确的142个碱基对长的dsRNA序列，旨在作为dsRNA检测中的阳性对照使用。

• Poly(I:C)：合成的dsRNA类似物（0.2–1kb）。

• IVT产物：使用T7 RiboMAX™ Express Large Scale RNA Production System内部生成的429bp IVT产物，并通过LiCl2纯化。

2. IVT产物中dsRNA的特异性检测

上图显示：用RNase I_f消化ssRNA显著减少了总RNA的量，但并未影响所检测到的dsRNA的量。

用RNase III将dsRNA消化成≤20bp的片段后，在Lumit^® dsRNA Detection Assay中导致了信号的完全丧失。

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