活微生物和病毒的检测在食品检疫、水质检测、疾病预防与控制领域被广泛应用。然而传统方法依赖于耗时的培养、菌落计数或显微镜观察，而且一些不可培养的 (VBNC) 物种不适用于此方法。

活力PCR (Viability PCR) 是一种可靠且免培养的方法，可灵敏、快速地检测活微生物的方法。PMA（叠氮溴化丙锭，Propidium Monoazide）染料虽可用于检测活菌，但是需要光照处理，操作较为复杂。

Promega开发了一种更简单有效的，无需光照的活力PCR检测系统（Viability PCR Reagent System），可减少假阳性，提高微生物和病毒检测的准确性。比染料或基于培养的方法更快、更简单。

检测原理

活力PCR试剂能够穿透受损的细胞（左侧）或病毒（右侧），并与核酸共价结合。因此，只有来自活的细胞或病毒的核酸才会产生PCR信号。可用于PCR扩增前处理样本，阻止非活细胞的DNA扩增，用于区分活细胞和死细胞，选择性扩增活细胞。

操作流程

只需将样本与试剂一起孵育，加入中和缓冲液，然后继续进行核酸提取和扩增。

产品应用

• 公共卫生领域：快速检测活的病原体；
• 制药和生物技术行业：精确检测污染物；
• 【已验证过的样本类型】
• 金黄色葡萄球菌（S. aureus）
• 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa）
• 大肠杆菌（E. coli）
• 分枝杆菌（Mycobacterium）
• 李斯特菌（Listeria）
• 军团菌（Legionella）
• 益生菌混合物（Probiotic cocktails）
• 诺如病毒（Norovirus）
• 甲型肝炎病毒（Hepatitis A）
• 腺相关病毒（AAV）

已验证过的样本基质

• 冷却塔水
• 饮用水
• 生物膜
• 可可粉
• 脓液
• 血液

产品特点

选择性扩增来自活细胞、活细菌或活病毒的核酸，减少假阳性，提供更可靠的活性数据；

比染料或基于培养的方法更快、更简单的活性检测替代方案；

可在数字PCR（dPCR）或实时定量PCR（qPCR）之前使用；

兼容高通量操作；

支持更精确、更一致的结果，这对于活细胞定量至关重要。

 

应用数据

一种简单有效的基于扩增的活/死细胞区分方法

Viability PCR Reagent System（活力PCR试剂系统）使用一种专利分子，该分子能够不可逆地修饰核酸，使其无法被扩增。这种分子对细胞和衣壳不具通透性，从而能够选择性地仅检测来自活细胞或完整病毒的核酸。使用活力PCR试剂处理可减少因受损病毒或死细胞的核酸而导致的假阳性扩增结果。

上图：使用（+VR）或不使用（-VR）活力试剂对含有 103 CFU/ml 的热处理细菌样本进行 DNA 扩增。